One Step qRT-PCR Enzyme Mix 是Hifair^® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit的核心酶，是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的混合酶。

本产品包含耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase的逆转录酶和抗体法封闭的UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase热启动聚合酶，可高效合成第一链cDNA，并进行扩增反应。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13197ES92  (10000 T)	13197ES95  (300000 T)	13197ES96 (400000 T)
13197-A	One Step qRT-PCR Enzyme Mix	10 mL	300 mL	400 mL

适用机型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
 

建议反应体系（buffer为13110试剂盒组分）

组分	体积（μL）	体积（μL）	终浓度
2×Hifair® V MP Buffer	12	15	1×
One Step qRT-PCR Enzyme Mix	1	1.5	-
Primer/Probe Mix (10 μM)	1-4	1-4	0.4 μM
模板 RNA	1-5	1-10	-
RNase Free H2O	To 25	To 30	-

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序
 

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
		60℃b	30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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产品名称	货号	规格
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HB200605