萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61 kDa的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化萤光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物荧光。海肾萤光素酶（Renilla luciferase）是一种分子量约为36 kDa的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化腔肠素（coelenterazine）氧化成coelenteramide，在氧化的过程中会发出波长为480nm左右的生物荧光。两种生物荧光都可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示：
图1：萤火虫和海肾萤光素酶检测原理图
Dual One Step Luciferase Reporter Gene Assay Kit是一种辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点。本试剂盒中含有高纯度的萤火虫萤光素和腔肠素，在同一个样品中先以萤火虫萤光素为底物检测萤火虫萤光素酶，后淬灭萤火虫萤光素酶的萤光信号，并同时以腔肠素为底物检测海肾萤光素酶，实现双萤光素酶报告基因检测。海肾萤光素酶作为内参，消除了因孔间细胞数量、转染效率不同等造成的影响，使得检测结果的准确性更高。
相对于闪光型Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（Cat NO.11402ES），本品具有以下优点：1）发光信号更稳定性，为实验设计提供了更大的灵活性。2）更符合高通量检测，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，大大的简化了实验流程。3）无明显刺激性气味。本试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2h左右（22℃），满足绝大多数高通量实验需求。
信号稳定：半衰期长（达2h），非常适用于高通量检测，不用担心萤光信号淬灭的问题。
操作简便：只需要加样-读值，即可完成实验。
兼容性好：可用于多种常用细胞培养液，如RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等。
荧光强度和稳定性媲美进口品牌
Yeasen（货号：11405）荧光强度和稳定性与P进口品牌相当。
淬灭效果与进口品牌相当
Yeasen（货号：11405）检测试剂和萤光素酶相互作用，可获得较佳的发光强度，加入海肾萤光素酶底物后，萤火虫萤光素发光淬灭情况，淬灭效果与P进口品牌相当。
在不同培养基上能正常发光，且发光效果差异小于P进口公司
Yeasen（货号：11405）在常用培养基：DMEM、F12、MEMα、RPMI-1640中都可以正常发光，并且不同培养基中的发光效果差异小于P进口公司。
-25~-15℃保存，有效期1年。
Q:双荧光素酶报告基因检测试剂盒中的两个底物是否需要避光的？
A:这两个底物操作过程中不需要严格避光。保存的时候避光保存，更重要的保存条件是低温， 尤其是腔肠素，推荐-80℃保存。
Q:双荧光素酶报告基因载体共转染时比例该如何进行优化与调整？
A:比例：根据具体实验情况进行调整。建议做预实验：如萤火虫载体与海参载体比例分别用 1:10、1:20、1:50、1:100。萤火虫荧光素酶检测发光值大于海参荧光素酶发光值的比例比较好
Q:萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的作用及区别？
A:萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）：主报告基因。海肾萤光素酶（ Renilla luciferase ）：内参报告基因。
[1] Yang D, Liu A, Zhang Y, et al. Essential Role of CRIM1 on Endometrial Receptivity in Goat. Int J Mol Sci. 2021;22(10):5323. Published 2021 May 18. doi:10.3390/ijms22105323(IF:5.924)
[2] Shen L, Ji C, Lin J, Yang H. Regulation of circADAMTS6-miR-324-5p-PIK3R3 ceRNA pathway may be a novel mechanism of IL-1β-induced osteoarthritic chondrocytes. J Bone Miner Metab. 2022;40(3):389-401. doi:10.1007/s00774-021-01308-0(IF:2.626)
[3] Chen B, Wang Y, Pei X, Wang S, Zhang H, Peng Y. Cellular Caspase-3 Contributes to EV-A71 2Apro-Mediated Down-Regulation of IFNAR1 at the Translation Level. Virol Sin. 2020;35(1):64-72. doi:10.1007/s12250-019-00151-y(IF:2.467)
[4] Yang J, Liu B, Xu Z, Feng M. Silencing of Circ_0135889 Restrains Proliferation and Tumorigenicity of Human Neuroblastoma Cells [published online ahead of print, 2022 Jun 27]. J Surg Res. 2022;279:135-147. doi:10.1016/j.jss.2022.05.025(IF:2.192)
